既要充分保留被測核酸,(特別是RNA)不被降解,又要盡可能維持原有組織或細胞的形態結構。
步驟:基本與免1疫組織化學技術相似,即組織要求新鮮和迅速投入固定液。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。標本較大時用刀片切成厚度不超過4mm的小塊,固定1小時即可,較大的標本固定不要超過2小時。某些組織對過度固定尤其敏感,如動物大腦,固定時間30-40分鐘,一般不要超過1小時。取材過程中避免手指、唾液和未經RNA酶抑制處理的器具接觸標本。冷凍切片以厚5~30um佳,40℃烤箱內干燥2小時后儲存在-80℃超低溫冰箱,在-20℃可保存2~3周,在-70℃可保存數月之久。
tunel流式細胞凋亡檢測服務通常稱為細胞程序性死1亡,是由基因控制的主動性細胞死1亡過程。越來越多數據發現,細胞凋亡與多種疾病密切相關,如癌細胞具有連續增殖、抵抗細胞凋亡能力,利用流式細胞儀分析細胞凋亡可為腫1瘤診斷,療1效評價和預后預測提供了重要的參考指標。
TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)細胞凋亡檢測試劑盒是用來檢測組織細胞在凋亡早期過程中細胞核DNA的斷裂情況,其原理是生物素biotinylate標記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細胞中斷裂DNA的3’-OH末端,并與連接辣根過氧化酶(HRP,horse-radish peroxidase)的鏈霉親和素streptavidin特異性結合,后者又與POD底物H2O2、二氨1基聯1苯1胺(DAB)產生深棕色反應,特異準確地定位正在凋亡的細胞,因而在光學顯微鏡下即可觀察凋亡細胞;由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA斷裂,因而沒有3‘-OH形成,很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細胞樣本(細胞涂片)在單細胞水平上的凋亡原位檢測。還可應用于抗腫1瘤藥的藥1效評價,以及通過雙色法確定細胞類型和分化階段。